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蛋白酶K具有廣泛的底物特異性
2019-12-27
蛋白酶K具有廣泛的底物特異性。即便存在洗滌劑的情況下，其仍可降解許多非變性狀態(tài)的蛋白質(zhì)。蛋白酶K分離自一種可在角質(zhì)上生長的真菌白色側(cè)齒霉菌(Engyodontiumalbum)（前稱腐生真菌(Tritirachiumalbum)。因此，蛋白酶K能夠降解非變性狀態(tài)的角質(zhì)（頭發(fā)），因而稱為“蛋白酶K”。1其切割的主要位點為帶有封閉氨基基團、鄰近脂族或芳香族氨基酸羧基端的肽鍵。因其廣泛的特異性，其較為常用。蛋白酶K（ProteinaseK），相對分子量約為29.3kDa,是一種切割...
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如何提取外泌體？都有哪些方法？
2019-11-26
外泌體是指包含了復(fù)雜RNA和蛋白質(zhì)的小膜泡(30-150nm)，現(xiàn)今，其特指直徑在40-100nm的盤狀囊泡。1983年，外泌體于綿羊網(wǎng)織紅細(xì)胞中被發(fā)現(xiàn)，1987年Johnstone將其命名為“exosome”。多種細(xì)胞在正常及病理狀態(tài)下均可分泌外泌體。其主要來源于細(xì)胞內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成的多囊泡體，經(jīng)多囊泡體外膜與細(xì)胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中。所有培養(yǎng)的細(xì)胞類型均可分泌外泌體，且外泌體天然存在于體液中，包括血液、唾液、尿液、腦脊液和乳汁中。有關(guān)他們分泌和攝取及其組成、“運載...
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如何解決胎牛血清使用中遇到的問題？
2019-11-15
如何儲存和解凍胎牛血清才不會使產(chǎn)品質(zhì)量受損?將血清從冷凍箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室溫下使之全融。但必須注意的是，融解過程中必須規(guī)則地?fù)u晃均勻。長時間儲存在2-8℃時，血清中的各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可見的混濁。因此，推薦在-20℃以下儲存血清，并避免反復(fù)凍融。我們建議血清應(yīng)保存在-2O℃。若存放于4℃時，請勿超過一個月。若一次無法用完一瓶，建議無菌分裝血清至恰當(dāng)?shù)臏缇萜鲀?nèi)，再放回冷凍。按如下操作可避免沉...
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PicoGreen熒光染料可對DNA樣品進行定量
2019-09-10
PicoGreen熒光染料法是一種靈敏的雙鏈DNA檢測方式，通過Modulus檢測儀可以檢測到pg級的微量DNA。這種方法主要用來測定微量的DNA殘留，或?qū)NA樣品進行定量。作為DNA染色劑之一的PicoGreen熒光染料特異性地與樣品中雙鏈DNA結(jié)合，產(chǎn)生熒光信號。PicoGreen技術(shù)可以檢測到低達(dá)0.5納克雙鏈DNA的變化。DNA的微量增加引起熒光信號強度或相對熒光單位（RFU）的顯著增加。其自發(fā)熒光忽略不計，重復(fù)性標(biāo)準(zhǔn)差異低，不受樣品化學(xué)成分的干擾。Picogree...
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擦亮眼睛：選購胎牛血清要注意這些問題
2019-04-22
市場上的胎牛血清種類繁多，魚龍混雜，很多科研工作者，特別是剛接觸細(xì)胞培養(yǎng)的人，難以分辨胎牛血清質(zhì)量的優(yōu)劣。選購胎牛血清請注意以下幾點：一、外觀拿到胎牛血清，先接觸的是血清外觀，對于缺少細(xì)胞培養(yǎng)經(jīng)驗的人來說，外觀的判斷尤為重要1、顏色根據(jù)血紅蛋白含量的不同，胎牛血清可表現(xiàn)出黃色或紅色，我國的細(xì)胞培養(yǎng)用血清標(biāo)準(zhǔn)是不高于20mg/dl，實際上，血紅蛋白含量的高低對血清并無直接影響，這個指標(biāo)的意義在于能體現(xiàn)出采血過程的嚴(yán)謹(jǐn)規(guī)范程度，良好的操作能降低血清的溶血。國產(chǎn)血清的采血點很分散，...
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外泌體可以來了解一下
2018-12-07
外泌體的提取主要包括以下幾種方式，一是超速離心法，這是目前外泌體提取常用的方法。此種方法得到的外泌體量多，但是純度不足，電鏡鑒定時發(fā)現(xiàn)外泌體聚集成塊，由于微泡和外泌體沒有非常統(tǒng)一的鑒定標(biāo)準(zhǔn)，也有一些研究認(rèn)為此種方法得到的是微泡不是外泌體。二是過濾離心，這種操作簡單、省時，不影響外泌體的生物活性，但同樣存在純度不足的問題。三是密度梯度離心法，用此種方法分離到的外泌體純度高，但是前期準(zhǔn)備工作繁雜，耗時，量少。四是免疫磁珠法，這種方法可以保證外泌體形態(tài)的完整，特異性高、操作簡單、不...
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EZ ECL Femto化學(xué)發(fā)光液（飛克級）
2018-11-13
使用方法1)取出印記膜，加入合適的封閉液在溫室下孵育20-60分鐘，同時振蕩，以封閉膜上非特異性蛋白結(jié)合位點。2)將膜從封閉液中取出，與一抗工作液在溫室孵育1小時，同時振蕩；或在28℃孵育過夜，不振蕩。3)將足量的洗滌緩沖液加至膜上，保證緩沖液將膜*覆蓋。振蕩孵育≥5分鐘，更換洗滌緩沖液并重復(fù)該步驟4-6次。增加洗滌緩沖液體積，洗滌次數(shù)和洗滌時間有助于降低背景信號。注：1）孵育前，膜在洗滌緩沖液中的短暫淋洗會提高洗滌效率；2）按前文建議的HRP標(biāo)記二抗稀釋度非常重要的。4)將...
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看東看西還不如看線粒體染色試劑盒的這篇內(nèi)容
2018-10-25
線粒體染色試劑盒使用一種專屬染料，選擇性地在不同膜電位的線粒體中積累。這種線粒體指示劑是一種疏水性復(fù)合物，可以輕易地滲透進入活細(xì)胞中，且當(dāng)進入細(xì)胞后就被鎖定在線粒體中。這種熒光性線粒體指示劑可以在線粒體中保留很長時間，因為該指示劑帶有能定位于細(xì)胞的基團。其關(guān)鍵特征是其染色效率顯著性提高，本標(biāo)記方法十分穩(wěn)定，需要親手操作的地方很少。它可以用于許多熒光研究中，例如微孔板分析，免疫組化和流式細(xì)胞術(shù)。它也可以用于多種不同類型的研究中，包括細(xì)胞粘附性、趨化性、多藥物抗性、細(xì)胞活性、細(xì)胞...
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